重组BirA生物素连接酶(CBD标签)

品    名：重组BirA生物素连接酶（CBD标签）（Recombinant BirA Biotin Ligase, CBD-tag; rC-BirA）

目 录 号：NRPA37S

规    格：100μg，1 mg，10 mg

产品形式：冻干粉，冻干前溶液为10mM Tris-HCl, pH8.0溶液

分 子 量：44.5kDa

等 电 点：7.14

活    性：≥4000 U/mg

纯    度：≥95%（SDS-PAGE检测）

浓度测定：280nm吸收法，摩尔吸光系数为6.85×104(mol/L)-1·cm-1，即c(g/L) = A280nm/1.54

内 毒 素：≤5EU/mg

来    源：大肠杆菌

保存条件：-20℃保存

有 效 期：3年



相关介绍：

  BirA生物素连接酶由大肠杆菌中的BirA基因编译表达，可用于特定蛋白质的生物素化反应，通过该酶的催化反应可将生物素共价连接到特定的蛋白质上。特定的蛋白质指含有AviTag的标签蛋白，可通过基因工程方式获得，AviTag一般由15个氨基酸残基组成的小标签（GLNDIFEAQKIEWHE），可以与目标蛋白的N端或C端融合，融合了AviTag的蛋白在BirA催化作用下，可将生物素共价连接到该标签中的赖氨酸上，实现定向生物素化。

  重组BirA生物素连接酶（CBD标签）由BirA基因与CBDtag、HisTag融合表达，并高度纯化，具有高活性、高效率、高纯度、高稳定性的特点，可用于含AviTag重组蛋白的体外生物素化。

  反应体系：50mM Bicine缓冲液，pH8.3，10mM ATP，10mM MgSO4，50μM生物素，40μM AviTag重组蛋白，10μg/ml rC-BirA，可参考下表加入各组分，30℃反应30min。也可以在其他温度反应，如室温25℃反应1-4h，或4℃反应过夜，不同的蛋白可能存在反应速率不一样的情况，可适当调节酶量，以获得更好的反应效果。除Bicine缓冲液外，其它缓冲液也可用于反应，如20mM Tris-HCl等，有些试剂会降低该酶的催化活性，如NaCl、甘油、硫酸铵、β-巯基乙醇等，应尽量降低样品中这些试剂的含量。反应结束后的样品可以通过透析、超滤、凝胶过滤等方式去除试剂，如需纯化可用我司的ee-Streptavidin NUPharose FF可逆亲和层析进行纯化，特异性纯化生物素化蛋白。

表1 rC-BirA催化AviTag重组蛋白生物素化参考反应体系

组分

体积

Buffer A: 500mM Bicine缓冲液，pH3.3

0.1ml

Buffer B: 100mM ATP，100mM MgSO4，500μM生物素

0.1ml

80μM AviTag重组蛋白

0.5ml

100μg/ml rC-BirA溶液

0.1ml

蒸馏水

0.2ml

总体积

1.0ml

活性定义：在上述反应条件下，30℃、30min催化1nmol AviTag重组蛋白生物素化所需的酶量为1U。